Post by jone447 on Aug 2, 2023 1:54:57 GMT -5
培养基（DMEM 1 g/l 葡萄糖 (Life Technologies)、1% 青霉素-链霉素 (Life Technologies)、10%热灭活胎牛血清 (Sigma-Aldrich)、1% GlutaMax (Life Technologies)) 并通过 100 μm 细胞过滤器 (BD) 过滤。然后用 25 ml 冰冷的低葡萄糖培养基洗涤悬浮液 3 次，并在 50 x g和 4 °C 下离心 2 分钟。肝细胞计数并以 0.4 ×10 6铺板细胞
隆到 PsiCHECK2 (Promega) 中。根pofecta亚洲手机号码列表min2000 转染细胞。收获细胞并使用双荧光素酶报告分析系统（Promega）进行分析。PsiCHECK2 载体包含第二个报告基因萤火虫荧光素酶，用于标准化插入的 3'UTR 上游海肾荧光素酶表达的结果。 肝脏 RNA 提取、测序、RT-PCR 验证和实时 qPCR 使用 Tissue Lyser II (QIAGEN) 在 Trizol 试剂 (Sigma) 中匀浆，从中央叶的肝片中
制备总 RNA。向每个样品中添加0.2体积的氯仿，在4℃下以12,000xg离心15分钟，最后在-20℃下用异丙醇沉淀上层水相30分钟。重悬于水中后，用 10 单位 DNase I 在 37 °C 下消化 RNA 样品 15 分钟，然后进行苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀。用于 RNA 测序的样品使用 RNeasy 柱（QIAGEN，#74104）进一步纯化。使用 Agilent 2100 生物分析仪对所有
隆到 PsiCHECK2 (Promega) 中。根pofecta亚洲手机号码列表min2000 转染细胞。收获细胞并使用双荧光素酶报告分析系统（Promega）进行分析。PsiCHECK2 载体包含第二个报告基因萤火虫荧光素酶，用于标准化插入的 3'UTR 上游海肾荧光素酶表达的结果。 肝脏 RNA 提取、测序、RT-PCR 验证和实时 qPCR 使用 Tissue Lyser II (QIAGEN) 在 Trizol 试剂 (Sigma) 中匀浆，从中央叶的肝片中
制备总 RNA。向每个样品中添加0.2体积的氯仿，在4℃下以12,000xg离心15分钟，最后在-20℃下用异丙醇沉淀上层水相30分钟。重悬于水中后，用 10 单位 DNase I 在 37 °C 下消化 RNA 样品 15 分钟，然后进行苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀。用于 RNA 测序的样品使用 RNeasy 柱（QIAGEN，#74104）进一步纯化。使用 Agilent 2100 生物分析仪对所有